Eficiência de duas técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães e avaliação seminal pós-criopreservação / [Efficiency of two techniques for recovering epididymal spermatozoids from dogs and seminal evaluation post cryopreservation]

O objetivo deste trabalho foi avaliar a recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, utilizando as técnicas de fluxo retrógrado (FR) e flutuação (FL) em diluidor Tris-gema, antes e após a criopreservação. Foram coletados 30 complexos testículo-epididímos (CTE), sendo 15 para FR e 15 para FL, e, logo após a recuperação dos espermatozoides, foram analisadas as alterações morfológicas nessas células espermáticas. Após a adição do diluidor, foram avaliados os parâmetros de motilidade total (MOT) e vigor (V) espermáticos. O sêmen pós-criopreservado foi submetido ao teste de termorresistência nos tempos T0, T30, T60 e T90 minutos, além da avaliação das membranas plasmática e acrossomal por sondas fluorescentes. Não houve diferença estatística entre as técnicas quanto à MOT e ao vigor no sêmen diluído (FR-MOT: 82,3% e V: 3,4; FL-MOT: 79,6% e V: 3,2) e pós-criopreservado (FR-MOT: 34% e V: 2,8; FL-MOT: 30% e V: 2,7). A partir do T30, houve diferença significativa quanto à MOT e ao vigor nas técnicas utilizadas, e o tempo também prejudicou o acrossoma espermático a partir do T30. Conclui-se que as técnicas de recuperação de espermatozoides epididimários de cães castrados, testadas neste trabalho, podem ser utilizadas para refrigeração e criopreservação de sêmen.(AU)

The objective of this work was to evaluate the recovery of epididymal spermatozoa from castrated dogs using retrograde flow (FL) and flotation (FL) techniques in Tris-egg yolk diluent, before and after cryopreservation. Thirty testicle-epididymal complexes (CTE) were collected, 15 for FR and 15 for FL and soon after spermatozoid recovery, morphological changes in these spermatic cells were analyzed. After addition of the diluent, the parameters of total motility (MOT) and vigor (V) were evaluated. The post-cryopreserved semen was submitted to thermoresistance (TTR) test at T0, T30, T60 and T90 minutes, as well as the plasma and acrosomal membrane evaluation by fluorescent probes. There was no statistically significant difference between techniques tested for MOT and vigor in the diluted semen (FR-MOT: 82.3% and V: 3.4, FL-MOT: 79.6% and V: 3.2) and post-cryopreserved (FR-MOT: 34% and V: 2.8, FL-MOT: 30% and V: 2.7). From the T30 there was a significant difference regarding MOT and vigor in the used techniques, and the time also damaged the spermatic acrosome from the T30. It is concluded that the epididymal spermatozoa recovering techniques from castrated dogs, tested in this study, can be used for semen refrigeration and cryopreservation.(AU)

Effect of urine contamination on stallion semen freezing ability.

Urospermia is a common ejaculatory dysfunction of stallions. Current practice suggests that urine contaminated semen should not be used for cryopreservation. The aim of this study was to determine effects of urine contamination on semen freezing. Sixty-five ejaculates from eight stallions were divided into no urine (CONT), low (20% urine, LOW), and high (50% urine, HIGH) samples. Semen was extended with a commercial cooling extender, cushion-centrifuged, resuspended to 200 million/mL in a commercial egg-yolk based extender, and cryopreserved in liquid nitrogen. A subset of ejaculates (n = 20) were split in two after cushion-centrifugation, and one half of the ejaculate was submitted to a single-layer gradient centrifugation before cryopreservation. Sperm motility parameters were assessed pre- and post-freezing with an automated sperm analyzer. Semen pH, creatinine, and urea concentrations were assessed in raw samples, after urine contamination and after centrifugation and extension. Statistical analyses were performed with ANOVA and Tukey's posthoc. There were significant reductions in total and progressive sperm motilities (i.e., %TM and %PM, respectively) with increasing urine contamination pre-freezing (%TM 67 ±â€¯1.7, %PM 50 ±â€¯2.2, CONT), (%TM 60.3 ±â€¯1.7, % PM 42.5 ±â€¯2.1, LOW), and (%TM 41.3 ±â€¯2, %PM 21.3 ±â€¯1.5, HIGH). Post-thaw motilities for CONT (%TM 54 ±â€¯2.3, %PM 40.8 ±â€¯3.3) and LOW (%TM 51.7 ±â€¯1.8, %PM 36.2 ±â€¯2.1) were not different, but were higher than the HIGH (%TM 31.5 ±â€¯1.2, %PM 17.1 ±â€¯1.0) (p < 0.05). Post-thaw sperm viability was significantly lower in the HIGH (54.7 ±â€¯2.4) than in the CONT (63.8 ±â€¯2.3) or LOW (64.6 ±â€¯3.4) groups. Semen creatinine and urine levels were significantly higher with increasing urine contamination and were significantly decreased after centrifugation and resuspension in freezing extender. Pre-treatment semen pH was significantly lower than semen contaminated with low or high amounts of urine, and pH decreased significantly after centrifugation and resuspension. Gradient centrifugation did not improve %TM in the control group, but it did improve pre-freeze %TM and %PM in the low and high groups and improved significantly post freezing %TM and %PM in the high urine contaminated group. Semen contaminated with a small amount of urine may be suitable for freezing, whereas highly contaminated semen might not be usable. Although urine was mostly removed in this fashion, the initial exposure to high quantities was sufficient to decrease sperm motility pre- and post-freezing, whereas low urine contamination was not as detrimental.

Plasminogen activator inhibitor 1 and Antipain preserve acrosome integrity of bovine spermatozoa during cryopreservation / Inibidor do ativador do plasminogênio 1 e antipaína preservam a integridade do acrossoma de espermatozoides bovinos durante a criopreservação

Seminal plasma contains serine proteases and serine protease inhibitor, which are involved in mammalian fertilization, and the inhibitors can be applied to prevent cold-induced sperm capacitation. The effects of different concentrations of two serine protease inhibitors were analyzed, Plasminogen activator inhibitor 1 - PAI-1 (70ƞg, 140ƞg and 210 ƞg) and Antipain (10µg, 50µg and 100µg) as supplementation to bovine semen cryopreservation extender. The effects of the inhibitors on the sperm parameters (sperm kinetics - CASA, acrosome integrity, plasma membrane integrity, mitochondrial membrane potential, sperm defects and acrosome reaction rate) were evaluated in the post-thaw semen. Cryopreservation of sperm with Antipain decreased post-thaw kinetic parameters of MP, VSL, LIN, SRT and the percentage of hyper-activated sperm while PAI-1 (210 ƞg) decreased VSL and LIN. Antipain and PAI-1 had no effect on the integrity parameters of the plasma membrane, mitochondrial membrane potential and sperm defects. Sperm cryopreserved in the presence of Antipain and PAI-1 (70 and 140 ƞg) preserved acrosome integrity, as they were able to complete the in vitro acrosome reaction. In conclusion, the serine protease inhibitors, Antipain and PAI-1 (70 and 140ƞg) are able to preserve the acrosome integrity of cryopreserved bovine sperm.(AU)

A criopreservação é parcialmente prejudicial à fertilidade do sêmen de bovinos e induz mudanças semelhantes à capacitação em espermatozoides. O plasma seminal contém serina-proteases e inibidores de serina-proteases que estão envolvidos na fertilização de mamíferos, e os inibidores podem ser aplicados para evitar uma capacitação espermática induzida pelo frio. Analisaram-se os efeitos de diferentes concentrações de dois inibidores de serina-proteases, inibidor do ativador do plasminogênio 1 - PAI-1 (70ƞg, 140ƞg e 210ƞg) e antipaína (10µg, 50µg e 100µg) na suplementação ao diluidor de criopreservação de sêmen bovino. Trinta e seis ejaculados de quatro bovinos Curraleiro Pé-Duro foram usados para criopreservação. Os efeitos dos inibidores sobre os parâmetros dos espermatozoides (cinética espermática - CASA, integridade acrossomal, integridade da membrana plasmática, potencial de membrana mitocondrial, defeitos espermáticos e taxa de reação acrossomal) foram avaliados no sêmen pós-descongelamento. A criopreservação de espermatozoides com antipaína diminuiu os parâmetros cinéticos pós-descongelamento de MP, VSL, LIN, SRT e a porcentagem de espermatozoides hiperativados, PAI-1 (210ƞg) diminuiu VSL e LIN. Antipaína e PAI-1 não tiveram efeitos nos parâmetros de integridade da membrana plasmática, no potencial de membrana mitocondrial e nos defeitos espermáticos. Espermatozoides criopreservados na presença de antipaína e PAI-1 (70 e 140ƞg) preservaram a integridade acrossomal, assim como foram capazes de completar a reação acrossômica in vitro. Em conclusão, os inibidores de serina-proteases, antipaína e PAI-1 (70 e 140ƞg) são capazes de preservar a integridade acrossomal de espermatozoides criopreservados de bovinos.(AU)

Avaliação in vitro do sêmen criopreservado de cães naturalmente infectados por Leishmania sp / In vitro evaluation of cryopreserved semen of dogs naturally infected by Leishmania sp

O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade in vitro do sêmen criopreservado de cães naturalmente infectados por Leishmania sp. Foram coletadas amostras de sêmen de 12 cães, sendo seis positivos (GI) e seis negativos (GII) para leishmaniose visceral (LV), semanalmente, totalizando quatro coletas por animal. O sêmen criopreservado foi avaliado pelo teste de termorresistência rápida (TTR), nos tempos zero, 30 e 60 minutos, pela análise computadorizada (CASA) e por meio de sondas fluorescentes; esta última técnica com o intuito de avaliar a integridade das membranas espermáticas. Houve diferença estatística pela técnica de TTR no parâmetro motilidade progressiva, no tempo 0min (68,33% GI e 72,50% GII), e no vigor espermático (2,67 GI e 3,0 GII), no tempo 30min. Quanto ao CASA, houve diferença estatística apenas na motilidade total (27,50% GI e 57,08% GII), embora os demais parâmetros seminais tenham apresentado valores relativos diminuídos nos cães do GI. Nas análises com sondas fluorescentes, foram observadas diferenças estatísticas entre os grupos quanto à integridade das membranas plasmática e acrossomal e ao potencial mitocondrial das células espermáticas. Concluiu-se que a LV pode comprometer a qualidade do sêmen criopreservado de cães parasitados.(AU)

The aim of this study was to evaluate the in vitro quality of cryopreserved semen of dogs naturally infected by Leishmania sp. 12 dog semen samples were collected, with 06 positive (GI) and 06 negative (GII) for Visceral Leishmaniasis (LV), weekly, totaling 04 collections per animal. The cryopreserved semen was evaluated by the Rapid Termorresistência Test (TTR), at 0, 30 and 60 minutes by computer analysis (CASA) and by means of fluorescent probes, the latter technique in order to assess the integrity of the sperm membrane. There was no statistical difference for the TTR technique in the progressive motility parameter, at time 0min (68.33% GI and GII 72.50%), and sperm vigor (2.67 GI and GII 3.0), time 30min. As for the CASA, there was statistical difference only in total motility (27.50% GI and GII 57.08%), although other semen parameters have submitted lower figures for GI dogs. In the analyzes with fluorescent probes statistical differences were noted between the groups in terms of plasma membrane integrity and acrosomal and mitochondrial potential of sperm cells. It was concluded that LV can compromise the quality of cryopreserved semen of infected dogs.(AU)

Impact of puberty status and melengestrol acetate supplementation before the breeding period on reproductive efficiency of Bos indicus beef heifers.

Two experiments were designed to evaluate the impact of puberty status and the administration of melengestrol acetate (MGA) before onset of the breeding period on ovulatory responses (Exp. 1) and conception rate after AI performed on estrus detection during 10 d and the pregnancy rate through 80 d of breeding period (Exp. 2) of pasture-grazed beef heifers. In Exp. 1, heifers (15 pubertal and 15 prepubertal) received 0.5 mg per heifer/d -1 of MGA over 14 d. No differences in the ovulatory responses were found 10 d after the MGA administration (pubertal = 46.7% vs. prepubertal P = 53.3%; P = 0.72). In Exp. 2, 368 heifers were randomly assigned to groups according to pubertal status and the MGA treatment. All heifers were inseminated on estrus detection for up 10 d after MGA administration and following exposure to bulls between 20 and 80 d. The MGA-treated heifers exhibited a greater AI service rate than control heifers (72.1 vs. 41.6%;P < 0.01); however, heifers receiving MGA had lower conception results following AI (51.6 vs. 71.4%; P = 0.01). In addition, MGA-treated heifers were more likely to have a corpus luteum in the middle of the breeding period (95.3 vs. 87.5%;P < 0.01), although the Cox proportional hazard of pregnancy rate was similar (P = 0.29) at the end of the breeding period. At onset of the breeding period, pubertal heifers presented a greater pregnancy rate following AI (pubertal P = 42.2% vs. prepubertal P = 24.9%; P = 0.01). Therefore, pubertal heifers seem to have greater overall reproductive efficiency than prepubertal heifers, particularly at the beginning of the breeding period. Interestingly, administration of MGA before the onset of the breeding period increased AI service rate but did not alter the rate of pregnancy throughout the breeding period of pasture-grazed beef heifers.

Características do sêmen de carneiros Dorper, Santa Inês e sem padrão racial definido, pré e pós-congelação, nos períodos chuvoso e seco / Characteristics of the semen of Dorper, Santa Ines and undefined breed sheep, pre-and post-freezing, in the rainy and dry period

Avaliaram-se as características espermáticas de carneiros Dorper, Santa Inês e sem padrão racial definido, nos períodos chuvoso e seco. Após ser colhido por vagina artificial, o sêmen foi avaliado quanto ao volume, ao turbilhonamento, à motilidade, ao vigor, à morfologia e à concentração, congelado e armazenado em botijão criogênico. Depois de descongelado, foram avaliadas a cinemática espermática, a integridade da membrana plasmática, a integridade do acrossoma e a atividade mitocondrial. Vigor espermático, motilidade total, motilidade progressiva, velocidade em linha reta e defeitos maiores não diferiram entre os períodos chuvoso e seco, porém volume, turbilhonamento, linearidade, retilinearidade e frequência de batimentos de cauda foram mais baixos (P<0,05) no período seco; já concentração espermática e defeitos totais apresentaram valores mais baixos no período chuvoso. Valores de integridade do acrossoma e da membrana plasmática, bem como o potencial de membrana mitocondrial, foram mais baixos (P<0,05) no período seco. Conclui-se que os períodos chuvoso e seco influenciam na qualidade espermática de ovinos criados na região Meio-Norte do Brasil e que esses animais têm uma qualidade espermática superior no período chuvoso, quando, portanto, deve ocorrer a criopreservação. Também se observou que, em relação à qualidade espermática, o melhor grupo de carneiros foi o Santa Inês...

The sperm characteristics of Dorper, Santa Ines and undefined breed ram in the rainy and dry seasons was assessed. After collection with an artificial vagina, the semen was evaluated for volume, turbulence, motility, viability, morphology and concentration, frozen and stored in a cryogenic cylinder. After thawing kinematic sperm, plasma membrane integrity, acrosome integrity and mitochondrial activity were evaluated. Sperm vigor, total motility, progressive motility, straight line speed and larger line defects did not differ between the rainy and dry seasons, however, volume, turbulence, linearity, straightness and frequency of tail beats were lower (P<0.05 ) in the dry period, and sperm concentration and total defects showed lower values during the rainy season. Values for acrosome integrity and plasma membrane and mitochondrial membrane potential were lower (P<0.05) in the dry season. It is concluded that the wet and dry period influence sperm quality in ram raised in the Mid - North region of Brazil, with a higher sperm quality in the rainy season, thus suggesting cryopreservation for that period. Also, the better ram group regarding sperm quality, was the Santa Ines...

Soroprevalência de pseudorraiva, peste suína clássica e brucelose em suínos do estado do Piauí / Seroprevalence of pseudorabies, classical swine fever and brucellosis in swine in the state of Piauí

Este trabalho teve como objetivo determinar a soroprevalência de pseudorraiva, peste suína clássica (PSC) e brucelose suína em suínos do estado do Piauí, Brasil. Foram coletadas amostras sanguíneas de 384 suínos de criações intensivas e extensivas do estado. Anticorpos anti-Brucella spp. foram detectados pelo teste do antígeno acidificado tamponado e confirmados pelo teste 2-mercaptoetanol, enquanto a detecção de anticorpos contra os vírus da PSC e pseudorraiva foi realizada por ensaio imunoenzimático (ELISA), utilizando-se kits comerciais específicos. Anticorpos anti-Brucella spp. foram detectados em 1,04% (2/192) dos suínos de criações intensivas. Dos rebanhos avaliados, 0,78% (3/384) dos animais exibiram anticorpos contra o vírus da PSC, sendo 1,04% (2/192) de criações intensivas e 0,52% (1/192) de criações extensivas. Anticorpos contra o vírus da pseudorraiva foram detectados apenas em suínos de criação extensiva, com prevalência de 5,2% (10/192). Esses são os primeiros dados sobre a soroprevalência da brucelose suína, pseudorraiva e PSC em rebanhos do Piauí. A detecção de 10 amostras positivas para pseudorraiva causa preocupação sobre a possibilidade da circulação viral na população suídea desse estado e revela uma necessidade premente de realização de estudos mais extensos para melhor compreender a importância dessas enfermidades de notificação obrigatória em estados da região Nordeste brasileira.

This study aimed to determine the prevalence of Pseudorabies, Classical Swine Fever (CSF) and Swine Brucellosis in swine in the state of Piauí, Brazil. Blood samples were collected from 384 pigs from intensive and small outdoor systems in the state. Anti-Brucella spp. antibodies were detected by Buffered Acidified Antigen Test and positive results confirmed by 2-Mercaptoethanol Test. Detection of antibodies against CSF and Pseudorabies virus were performed by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) using specific commercial kits. Only two samples (1.04% - 2/192) from the intensive system were seropositive to Brucella spp. In the evaluated herds, 0.78% (3/384) of animals had antibodies against CSF virus, two from outdoor pigs (1.04% - 2/192) and one from intensive systems (0.52% - 1/192). Antibodies against the Pseudorabies virus were detected only in outdoor pigs, with seroprevalence of 5.2% (10/192). This is the first report on seroprevalence of Pseudorabies, CSF and Brucellosis in hog farms in Piauí, Brazil. The detection of 10 positive cases raises a concern regarding Pseudorabies virus circulation in the swine population in the state and reveals a need for further studies to better understand the real situation and status of obligatory notified diseases in the swine herds in the Northestern states of Brazil.

Qualidade do corpo lúteo e do embrião de ovelhas Santa Inês superovuladas com FSH associado à rbST / Quality of corpus luteum and embryo of Santa Inês ewes superovulated with FSH associated with rbST

Avaliou-se o efeito da somatotropina bovina recombinante (rbST) sobre a qualidade do corpo lúteo e do embrião e sobre a concentração de progesterona (P4), em ovelhas da raça Santa Inês doadoras de embriões. Foram utilizadas 13 doadoras, distribuídas aleatoriamente em dois grupos, G1 (n=7) e G2 (n=6). Em ambos os grupos, as doadoras foram sincronizadas com implante vaginal por 14 dias, receberam 100µg de PGF2α (Ciosin®) no sétimo dia e foram superovuladas, a partir do 12º dia, com 250UI de FSH (Folltopin-V®) em seis doses decrescentes. No dia da retirada do implante, as doadoras do G2 receberam 125mg de rbST (Boostin®) e foram cobertas por macho Santa Inês a cada 12 horas até o final do estro. No sexto dia após a primeira cobrição, foram avaliadas, por laparoscopia, a resposta superovulatória e a quantidade e a qualidade dos corpos lúteos. Após as avaliações, as colheitas embrionárias foram realizadas por laparotomia. A administração da rbST no protocolo de superovulação promoveu aumento significativo (P<0,05) no número de corpos lúteos do tipo I (9,00 x 5,28) e na qualidade embrionária (4,33 x 2,00).

We evaluate the effect of recombinant bovine somatotropin (rbST) on the quality of the corpus luteum and embryo and on the concentration of progesterone (P4) in donors embryo sheep Santa Ines. 13 donors were used, randomly assigned to two groups, G1 (n=7) and G2 (n=6). In both groups, the donors were synchronized with vaginal implant for 14 days and received 100µg of PGF2α (Ciosin®) on the seventh day and were superovulated, from the 12th day, with 250IU of FSH (Folltopin-V®) in six decreasing doses. On the day of implant removal the donor G2 received 125mg of rbST (Boostin®), and were covered by Santa Inês male every 12 hours until the end of estrus. In the sixth day after the first mating were evaluated by laparoscopy, superovulatory response and the amount and quality of the corpus luteum. After the evaluations, the embryonic harvests were performed by laparotomy. The administration of rbST in superovulation protocol promoted a significant increase (P <0.05) in the number of corpus luteum of type I(9.00 x 5.28) and embryo quality (4.33 x 2.00).

Características seminais de cäes da raça Pastor Alemäo / Seminal characteristics of German Shepherd dogs

Sêmen de 25 cäes da raça Pastor Alemäo, com 1 a 7 anos de idade e pesando 30 a 35 quilos, foi coletado por masturbaçäo. Com o objetivo de utilizar o material para inseminaçäo artificial, colheu-se a segunda e parte da terceira fraçäo, constatando-se, em média, volume de 7,17 ml; cor branca e aspecto leitoso; motilidade de 68,84 por cento; vigor de 3,5; concentraçäo de 136.192 espermatozóides por mm3 e de 889.772.000 por ejaculado; defeitos espermáticos maiores de 9,92 por cento e menores de 7,62 por cento. O pH do sêmen, dos diluidores e do sêmen diluído variou, respectivamente, de 6,02 a 6,60; 5,85 a 6,90; e 5,97 a 6,76; a pressäo osmótica de 285,20 a 295,00; 240,00 a 310,00; e 272,32 a 303,92 mOsmois e a concentraçäo de sódio e potássio, respectivamente, para o plasma seminal e os 4 diluidores, de 134,40 a 156,00; 7,80 a 13,72; 3,00 a 270,00; e 6,00 a 25,00 mEq/l. Verificou-se que entre cäes, houve variaçäo significante de todas as características seminais, exceto a pressäo osmótica e, ainda, correlaçöes entre os caracteres seminais e entre estes e os totais de patologias espermáticas. A variabilidade das características seminais entre os cäes foi bem maior quando comparada entre as colheitas de cada animal, exceto a pressäo osmótica e a concentraçäo de sódio, que se apresentaram de maneira inversa